該如何設計實驗檢測粒線體功能呢?－豐技生技's Blog

在先前的” 粒線體功能與藥物-研究員不可錯過的粒線體抑制劑總整理! ”文章中，我們介紹了粒線體相關的藥物代謝途徑，以及會影響粒線體功能的臨床用藥。然而，相關抑制劑這麼多種，到底該如何利用這些粒線體相關化合物來設計實驗，了解粒線體的功能是否異常呢?

(圖片源自: https://phys.org/news/2017-06-mitochondria-blood-cell-formation.html)

在此我們為各位介紹粒線體功能的檢測試劑-Biolog MitoPlate產品!
讓您用一組試劑就能了解多種粒線體代謝功能有無異常!

Biolog MitoPlates 設計多組檢測，全方位了解粒線體功能

Biolog提供的MitoPlates產品，可以幫助研究人員更快速的了解粒線體功能。MitoPlate是在一個96孔盤實驗中，預先加入了96組粒線體相關功能分析的化合物，了解粒線體的代謝功能以及對藥物的敏感度。

這項檢測試劑可以應用在各種領域的粒線體研究，包括：

細胞分化 (Cell differentiation)
癌症與老化 (Cancer & Aging)
神經系統疾病 (Neurological disorders)
代謝異常 (Metabolic disorders)
免疫細胞活化 (Immune cell activation)
細菌/病毒感染 (Bacterial/Viral infection)
先天性遺傳缺陷 (Inborn genetic defects)

MitoPlates測定原理

透過測量電子流入粒線體電子傳遞鏈的速率，來了解粒線體的功能。試劑中所附的MitoPlate，反應槽中帶有不同測試物，包括：22種抑制劑、電子傳遞鍊中，各種不同的電子轉運蛋白、以及不同的代謝基質(substrate)，如: L-蘋果酸(L-malate), 琥珀酸(succinate), 丙酮酸(pyruvate) …等等，且實驗操作時會加入四唑氧化還原染劑 (tetrazolium redox dye (MC))。

◆反應槽中會發生下列生化反應:

1. 各式各樣的電子轉運蛋白在接收電子後，會讓電子進入粒線體中，參與不同代謝路徑

2. 這會使代謝基質在粒線體中，展開代謝分解的過程。

3. 基質代謝分解時，會產生NAD（P）H或FADH2，並活化電子傳遞路徑。

4. 每個反應槽中，不同的抑制劑會影響上下游不同位置的電子傳遞鏈。

5. 最終會使電子傳遞的終端接收者-四唑氧化還原染劑 (tetrazolium redox dye (MC))，染劑在還原反應時，會變成紫色。

6. 藉由觀察染劑的呈色反應或速率，檢測線粒體對22種不同抑製劑的敏感性。

該如何利用MitoPlate進行各種研究呢?
歡迎收看下方Biolog的原廠介紹影片，了解更多應用!

New Probes of Mitochondrial Function from Biolog on Vimeo.

簡單的操作流程:

步驟1：將細胞通透性緩衝液和氧化還原染料試劑混合物加到反應槽中。

步驟2：在反應槽中加入細胞懸液，開始實驗測定。

步驟3：將MicroPlate裝入OmniLog®儀器，動態讀取呈色速率。

實驗操作影片如下:

Biolog MitoPlate S-1 and I-1 Protocol (10-17-2018) from Biolog on Vimeo.

MitoPlate的特色與優勢：

預先coating 96個測試實驗
可了解不同代謝基質及抑制劑對線粒體功能的影響
操作簡便，且適用各種細胞類型 (ex. adherent or suspension cells, transformed cell lines or primary cells)
每個反應槽僅需20,000~40,000顆細胞
新型的四唑染劑設計，讓電子傳遞現象可以直觀的藉由顏色測定
OmniLog儀器提供溫控系統，在培育細胞的同時，動態讀取多個實驗反應盤 (讀取速度: 每15分鐘50盤 ~ 每5分鐘16盤）